© Коллектив авторов, 2015 УДК 616-092
Волков Е.Е.1, Извольская М.С.2, Воронова С.Н.2, Василенко А.М.3, Волков А.Е.1

Новая фитотерапевтическая композиция для восстановления костной и хрящевой тканей. Экспериментальное исследование

1 — Клиника преморбидных и неотложных состояний ФКУ «МУНКЦ» им. П.В. Мандрыка МО РФ, 121002, Москва, Серебряный переулок, д. 4
2 — ФГБУН «Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова» РАН, 119334, Москва, ул. Вавилова, д. 26
3 — ФГБУ «Российский научный центр медицинской реабилитации и курортологии» Минздрава России, 1211099, Москва, ул. Новый Арбат, д. 32

Представлена новая импортозамещающая композиция смеси порошков лекарственных растений и пчели­ного подмора. В преднизолоновой модели остеопороза показаны дозозависимые восстановительные эффекты костной и хрящевой тканей тазобедренных суставов мышей. Нежелательных побочных эффектов при приеме композиции не наблюдалось. Предполагается возможность эффективного применения разработанной компо­зиции в качестве комплементарного средства лечения остеопороза.

Ключевые слова: остеопороз, комплементарная медицина, натуропатия, фитотерапия.

Для цитирования: Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2015; 59(4): 30-34.

Volkov E.E.1, Izvolskaya M.S.2, Voronova S.N.2, Vasilenko A.M.3, Volkov А.Е.1

New phytotherapeutic composition for restoring bone and cartilage. Experimental study

1 — Clinic premorbid and emergency conditions FKU «MONKS» them P.V. Mandryka, 121002, Moscow, Silver lane, 4
2 — Koltsov Institute of Developmental Biology, Russian Academy of Sciences, 119334, Moscow, Vavilov St. 26
3 — Federal state budgetary institution «Russian Research Centre of Medical Rehabilitation and Balneology» Russian Ministry of Health, 121099, Moscow, New Arbat St. 32

Presents a new import-substituting the composition of the powder mixture 60 medicinal plants and dead bees. In prednisolonbuy models of osteoporosis have shown dose-dependent regenerative effects bone and cartilage of the hip joints of mice. Unwanted side effects when taking composition was observed. It is assumed the possibility of effective application of the composition as a complementary treatment for osteoporosis.

Key words: osteoporosis, complementary medicine, naturopathy, herbal medicine.

For citation: Patologicheskaya Fiziologiya I eksperimentalnaya terapiya. 2015; 59(4): 30-34.

Для корреспонденции: Василенко Алексей Михайлович, доктор мед. наук, проф. гл. науч. сотр. ФГБУ «Российский научный центр медицинской реабилитации и курортологии» Минздрава России, e-mail: vasilenko-a-m@mail.ru For correspondence: Vasilenko A.M., e-mail: vasilenko-a-m@mail.ru

Остеопороз входит в число наиболее актуальных проблем современного здравоохранения. Согласно данным ВОЗ, этим заболеванием страдают около 75 млн. граждан Европы, США и Японии. В связи с постарением населения Европы к 2050 г. ожидает­ся рост количества остеопоротических переломов шейки бедренной кости с 500 тыс. до 1 млн. случаев ежегодно. [1]. В России остеопорозом страдают 14 млн. чел. (10% населения страны) старше 50 лет. Еще у 20 млн. обнаруживается остеопения [2, 3]. Остеопороз занимает четвертое место по частоте инвалидизации после болезней сердечно-сосудистой системы, сахарного диабета и онкологических заболе­ваний.

Предложено множество средств и методов лечения и профилактики остеопороза [1, 2, 4]. Однако оптими­стические ожидания, связанные с широким внедрением в практику множества препаратов для его лечения оправдываются не в полной мере. Это обусловлено вы­соким уровнем лекарственных ятрогений [5], высокой ценой и недостаточной эффективностью препаратов. Поэтому поиск комплементарных подходов к коррек­ции костного метаболизма, в том числе в арсенале на­туропатических средств, остаётся актуальным.

Некоторые компоненты растительного и животно­го происхождения входят в состав широко известных препаратов, рекомендуемых при остеопорозе. Напри­мер, основными действующими компонентами препа­рата «СустаВит» являются сульфат глюкозамина, по­лучаемый из экзоскелетов ракообразных, бромелайн выделяемый из плодов ананаса, босвеллин из смолы, босвеллии (Boswellia serrata) и куркумин из корня куркумы (Curcuma longa). Лечебно-профилактиче­ская композиция «Остеомакс Экстра» для улучшения функционального состояния опорно-двигательного аппарата включает белково-гликозидный комплекс из голотурии, экстракты корня лопуха и коры осины. Из патента US 20041211024 A1 (24.06.2004), известна композиция для лечения и предупреждения остеоарт­рита, ревматоидных артритов и подобных болезней, содержащая экстракт крапивы и кверцетин.

Запатентована и композиция, содержащая значи­тельно большее количество компонентов [6].

Как правило, натуропатические средства растите­льного и животного происхождения применяются в комплексе с лечебной физкультурой и разнообраз­ными физиотерапевтическими методами. В настоящее время активно применяется разработанный профессо­ром Хуан Кэ-Цинем комплексный метод лечения [7]. Метод включает динамично изменяющуюся схе­му электропунктуры через аппликаторы из лекарст­венных трав (фито-электропунктура), лечебную гим­настику, использование костылей, фитованны и массажи по индивидуальным программам. В процессе внедрения в российское здравоохранение, оригиналь­ный метод профессора Хуан Кэ-циня, сохранив основные свои позиции, подвергся ряду изменений, касающихся его материального обеспечения, порядка обследования и лечения пациентов. В частности, пер­воначально использовались готовые импортные фильтр-пакеты фитосборов шэнгусань, хунбаосань и чжэньцисань производства Пекинской компании «Божань». С 2011 г. наладили полный цикл производства фильтр-пакетов, содержащих сборы из оте­чественного ареала аналогичные оригинальным ки­тайским [8].

Обязательным компонентом оригинального мето­да лечения является регулярный приём препарата тра­диционной китайской медицины Чэнцзай, состоящего (по заявлению производителя) из 22 компонентов растительного и животного происхождения. Чэнцзай обладает поливалентным действием, в том числе, и на основные патогенетические механизмы остеопороза: усиливает тканевое кровообращение, оказывает цитопротективное и антиоксидантное действие, активиру­ет регенеративные процессы, повышает минерализа­цию и плотность костной ткани [9]. Однако боль­шинство входящих в него лечебных растений не рас­тет на территории РФ, а технология приготовления этого препарата производителями не разглашается. Указанные обстоятельства послужили основанием для разработки отечественной фитотерапевтической композиции взамен импортируемому препарату Чэн­цзай.

Цель исследования: разработать импортозамеща­ющую натуропатическую композицию для компле­ментарной помощи пациентам с остеопорозом и оце­нить её действие в эксперименте.

Методика

Состав композиции определили путем изучения многочисленных фармакологических свойств водных извлечений более чем из 150 растений. Из них были выбраны те, которые оказывают наиболее выражен­ное влияние на отдельные звенья патогенезов остео­пороза и асептического некроза и характеризующиеся полипотентным действием. В композицию были ото­браны растения, обладающие следующими свойствами.

Противовоспалительные: береза, вероника, мята длинолистная, мята перечная, мокрица, солодка, ива, шалфей, черника, осина, ромашка, сенна, крушина, череда, володушка, душица, зюзник, иван-чай, иссоп, мелисса, пион, полынь, ряска, синеголовник, лабаз­ник, чабрец.

Гепатопротективные: осина, подорожник, воло­душка, дягиль, золототысячник, зубчатка, люцерна, полынь, репешок, астрагал, солодка.

Иммуномодулирующие: солодка, подорожник, володушка, дрок, дурнишник, дягиль, зубчатка, ис­соп, красный корень, красная щетка, люцерна, меду­ница, полынь, репешок, синеголовник, смородина, ла­базник, чабрец, эхинацея.

Регенеративные: солодка, горец птичий, подо­рожник, сушеница, герань кроваво-красная, герань луговая, герань лесная, дурнишник, золотая розга, люцерна, манжетка, мокрица, пикульник, подмарен­ник, смородина, сныть, астрагал.

Корректирующие функции эндокринных желез (гипофиза, надпочечников, щитовидной железы, по­ловых желез): солодка, шалфей, ежевика, подорож­ник, дрок, дурнишник, зубчатка, зюзник, красный корень, красная щетка, люцерна, манжетка, смороди­на, сурепка, лабазник, чернобыльник, эхинацея, аст­рагал.

Вазопротектирующие: горец перечный, горец птичий, сушеница, посконник, астрагал.

Стресс-лимитирующие: мята длиннолистная, мята перечная, ромашка, сушеница, душица, дягиль, зюзник, иван-чай, красный корень, красная щетка, мелисса, манжетка, мокрица, пион, первоцвет, по­сконник, пустырник, синеголовник, лабазник, чабрец, чернобыльник.

Минералорегулирующие: солодка, горец пти­чий, череда, герань кроваво-красная, герань луговая, герань лесная, дурнишник, люцерна, пикульник, под­маренник, сныть, смородина.

Улучшающие мозговое кровообращение: астра­гал, первоцвет, герань, вероника, мята, смородина, посконник, очанка.
Из средств животного происхождения был вы­бран подмор пчёл, действующим началом которого является пчело(апи)зан — более мощный полипотентный биологический регулятор, чем хитозан ракооб­разных.

Экспериментальные исследования эффективности заявленной композиции проведены на самцах и сам­ках мышей линии Balb/c 2-месячного возраста мас­сой 20 г (Питомник Столбовая, РАН). Мышей со­держали в стандартных условиях по 5 особей в клетке с контролируемыми режимами температуры (24°C) и освещения (в течение 12 ч) и со свободным доступом к воде и пище. Для моделирования эксперименталь­ного остеопороза использовали синтетический глюкокортикоид преднизолон, который вводили в/м мы­шам в дозе 1 мг/мышь в течение 14 сут. Доза вводи­мого преднизолона была выбрана на основе данных литературы [10].
Все животные были разделены на 6 групп по 10 мышей в каждой (5 самок + 5 самцов). 1 — конт­рольная группа — интактные мыши. Животным остальных пяти групп вводили преднизолон. Живот­ных 2-й группы забивали с помощью цервикальной дислокации через 14 сут. после 14 — сут. введения преднизолона. Извлекали бедренные кости, которые использовали для гистологического анализа и морфо­логической оценки исходной выраженности патологического процесса. Животные 3-й группы после 14 — сут. введения преднизолона в течение 30 сут. еже­дневно получали порции каши, служившей основой для скармливания заявленного средства. Животные с 4 по 6-ю группу в те же сроки получали кашу с за­явленным средством в разных дозах: 5,0, 50 и 250 мг/мышь. По окончании курса приема заявлен­ного средства проводили гистологический анализ бед­ренных костей.
Кости мышей всех шести групп фиксировали в 10% формалине, приготовленном на фосфатно-со­левом буфере (ФСБ, 0,02М, рН 7.6) 24 ч. при ком­натной температуре. Декальцинировали в 5% трихлоруксусной кислоте 24—48 часов, затем промывали в ФСБ и замораживали в изопентане при -40°С. Да­лее приготавливали срезы толщиной 10 мкм на кри­остате Leyca (Германия). Срезы высушивали при комнатной температуре в течение 1 часа и окрашивали гематоксилин-эозином с последующим анализом изображения с помощью светового микроскопа Olympus Vanox AH BT3 (Германия), увеличение (х100) или (х200). Изображения фотографировали и в поле зрения проводили морфологический анализ клеток. Для определения достоверности различий между опытом и контролем использовали непарамет­рический двусторонний критерий Манна—Уитни (U-тест).

Результаты и обсуждение

Анализ гистологических данных показал, что 14 — сут. введение преднизолона вызывает выражен­ные изменения как хрящевой ткани головок бедрен­ных костей мышей, так и непосредственно костной ткани (рис. 1, 2). Как видно из рис. 1Б, под дейст­вием преднизолона значительно усиливается проли­феративная активность хондроцитов (112 ± 7) по сравнению с контрольной группой животных, не получавших инъекции преднизолона (12 ± 4, рис. 1,А достоверность различия между опытной и контрольной группами: M ± SEM; р < 0,05). Осо­бенностью суставного хряща, по сравнению с дру­гими видами тканей в организме является наличие небольшого количества клеток, окруженных боль­шой площадью межклеточного пространства — матриксом, представленным коллагеновыми волок­нами и основным веществом. Увеличение числа хондроцитов происходит за счет внеклеточного матрикса, что приводит в дальнейшем к их качест­венным изменениям.

По истечении 30 сут. в 3-й группе животных, по­лучавших кашу без заявленной композиции, количе­ство хондроцитов незначительно снижалось (83 ± 6, рис. 1,В) по сравнению со 2-й группой животных, забитых через 14 сут. после введения преднизолона. Заявленная композиция, принимаемая в дозе 5,0 мг/мышь, оказывала слабо выраженный корри­гирующий эффект на хрящевую ткань (число хонд­роцитов составляло 52 ± 6, рис. 1,Г). Восстановле­ние гиалинового хряща практически до нормы на­блюдалось при приеме композиции в дозах 50 и 250 мг/мышь (8 ± 3 и 20 ± 7 соответственно, рис. 1,Д, Е). Достоверность различий между опытной (5 и 6-й) и контрольной (2-й) группами: M ± SEM; р < 0,05 и были одинаковыми у самцов и самок.

Рис. 1. Срезы головок бедренных костей у контрольных животных (А — интактные), (Б — после в/м введения преднизолона в дозе 1 мг/мышь через 14 и (В) через 30 дней) и после приема композиции в течение 30 дней в дозах 5 мг/мышь (Г), 50 мг/мышь (Д), 250 мг/мышь (Е). Окраска ге­матоксилин-эозином. Обозначения: хц — хондроциты, хб — хондробласты, кс — кровеносные сосуды, кв — коллагеновые волокна, км — кост­ный мозг. Увеличение: объектив х 10, окуляр 10. Число животных в каждой группе n = 10.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Рис. 2. Срезы бедренных костей у контрольных животных (А — интактные, Б — после в/м введения преднизолона в дозе 1 мг/мышь через 14) и (В) 30 дней) и (Г) после приема композиции в течение 30 дней в дозе 250 мг/мышь. Окраска гематоксилин-эозином. Обозначения: оц — остеоциты, об — остеобласты, кс — кровеносные сосуды, кв — коллагеновые волокна, км — костный мозг. Увеличение: объектив х 20, окуляр 10. Число животных в каждой группе n = 10.

Заявленная композиция в дозе 250 мг/мышь оказывала корригирующий эффект также и на ко­стную ткань (рис. 2). Под её действием наблюда­лось восстановление костной ткани до показателей контрольных животных (рис. 2, А, Г). Через 14 сут. после введения преднизолона в костной ткани были выявлены многочисленные участки разрывов (рис. 2Б), которые не исчезали и через 30 сут. после инъекции (рис. 2, В). Кроме того, через 14 сут. после введения преднизолона в кост­ной ткани была выявлена хаотичная ориентация коллагеновых волокон (рис. 2,Б), тогда как после приема композиции их расположение было подоб­но расположению у контрольных интактных жи­вотных (рис. 2, А).

Эффективность заявленной композиции обнару­живалась также по различиям внешнего вида и пове­дения мышей в основных группах животных по срав­нению с мышами 3-й группы, не принимавших препа­рат. Нежелательных побочных эффектов при приеме композиции не наблюдалось.

Вывод

Полученные данные свидетельствуют о перспек­тивности применения разработанной фитотерапевти­ческой композиции в качестве комплементарного средства лечения остеопороза.

References

Rudenko Je.V., Buglova A.E., Rudenko E.V., Samohovec O.Ju. Drug treatment of osteoporosis in adults Uchebno-meto- dicheskoe posobie. Minsk: BelMAPO, 2011; 22 . (in Russian).
Mihajlov E.E., Benevolenskaja L.I. Guide to osteoporo­sis. Ed. M: BINOM 2003;10-55. (in Russian)
Lesnjak O.M. Osteoporosis audit in the Russian Federati­on. Profilakticheskaja medicina/ 2011; 2: 7-10. (in Russian)
Osteoporosis Under the editorship O.M Lesnjak, L.I. Bene­volenskaja. 2-e izd., pererab. i dop. (Serija «Klinicheskie rekomendacii») Moscow; GJeOTAR-Media, 2010; 272. (in Russian)
Sychj ov D.A. How to avoid farmageddon? Refleksoterapija i komplementarnaja medicina. 2015; 2(12): 5-11. (in Russian)
Trifonov V.N., Elistratova Ju.A., Elistratov K.G., Ku­rus’ N.V., Homjakova I.V., Elistratova T.V. Composition for the treatment and prevention of osteoarthritis, osteoporosis and osteoarthritis joints. Patent RF № 2521227. zajavka: 2013-03-28, publikacija patenta: 27.06.2014. (in Russian)
Lang FP, Huang H, Huang H, Huang Kq, Zhang JC. Retrospective analysis of therapeutic efficacy in 1 425 cases of femoral head necrosis. Zhonggou Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008; 12(33): 6500-4 (China).
Volkov E.E. A possible alternative to hip replacement in avascular necrosis of the femoral head. Refleksoterapija i komp­lementarnaja medicina. 2013; 3(5): 26-34. (in Russian)
Chen Y, Huang K, Lang F, et al. Experimental study on cheng zai wan for treatment of necrosis of the femoral he­ad. J Tradit Chin Med. 2003; 23 (4): 292-8.
Valeeva I.E., Ziganshina L.E., Burnashova Z.A., Ziganshin A.U. Dimephosphon and xydiphone influence the li­pid peroxidation indices and antioxidant system characteris­tics in rats upon prolonged chronic administration of predni­solone. Jeksperimental’naja i klinicheskaja farmakologija. 2002; 65(2): 40-3. (in Russian)